一、基础观察实验
1. 临时装片制作
取材：撕取叶稍带叶肉的下表皮（叶绿体大而稀疏）或黑藻幼叶（细胞质流动明显）
操作：载玻片滴清水→放置材料→盖盖玻片（45°角缓慢覆盖防气泡）→吸水纸吸除多余水分
2. 显微镜观察技巧
低倍镜定位清晰细胞后转高倍镜，叶绿体呈绿色椭球形或球形，散布于细胞质中
观察黑藻细胞质流动时，叶绿体运动方向可标记流动方向（靠近叶脉处更明显）
二、核心实验原理与操作
1. 色素提取与分离
提取：无水乙醇研磨叶片（加二氧化硅使研磨充分，碳酸钙保护叶绿素）
分离：滤纸条画细线（需重复2-3次），层析液扩散后色素带从上至下为橙黄（胡萝卜素）、黄（叶黄素）、蓝绿（叶绿素a）、黄绿（叶绿素b）
2. 光合作用验证实验
暗处理→遮光对照→酒精脱色→碘液检测（见光部分变蓝证明淀粉生成）
关键点：水浴加热酒精防燃，脱色至黄白色再滴碘液
三、进阶实验分析
1. 叶绿体功能
离体叶绿体活性实验：通过希尔反应测定放氧量，验证光反应与类囊体完整性关系
电子受体对比：Fecy（亲水性）与DCIP（亲脂性）对光反应速率的影响
2. 异常现象
若滤纸条色素带模糊：可能层析液触及滤液细线或画线不匀
显微镜下叶绿体不清晰：材料过厚或装片水分不足导致细胞失活
四、学习建议
动态理解：结合萨卡班甲鱼等趣味视频记忆光合作用过程
对比总结：整理不同实验材料（/黑藻/藓类）的适用场景
安全提示：酒精灯、有机溶剂操作需远离明火
通过以上分阶段学习，可系统掌握叶绿体实验的操作与原理，建议配合实验视频深化理解。
